ПЦР (полимеразная цепная реакция)

Наиболее чувствительным и быстрым методом диагностики ЛЮБОЙ инфекции является полимеразная цепная реакция (ПЦР).

В основе метода ПЦР лежит комплиментарное достраивание участка геномной ДНК или РНК возбудителя, осуществляемое in vitrо с помощью фермента термостабильной ДНК-полимеразы. Специфичность метода определяется уникальностью генетического материала выявляемых инфекционных агентов, к которому подобраны олигонуклеотидные праймеры, участвующие в процессе амплификации.

ПЦР-анализ клинического образца включает в себя три основных этапа: пробоподготовка, амплификация и регистрация результатов. Забор клинических образцов для проведения ПЦР диагностики не требует специальных транспортных сред. Объектом исследования может служить любой биоматериал (соскоб клеток цервикального канала, уретры, отделяемое содержимое влагалища), взятый от больного и доставленный в ПЦР-лабораторию. В результате несложных манипуляций из полученного биоматериала выделяют нуклеиновые кислоты (ДНК или РНК), являющиеся матрицей в реакции амплификации. Реакция амплификации представляет собой многократно повторяющиеся циклы синтеза специфической области ДНК-мишени в присутствии термостабильной ДНК-зависимой ДНК-полимеразы. В каждом цикле происходит удвоение числа копий амплифицируемого участка, что позволяет за 30-40 циклов наработать фрагмент ДНК, ограниченный парой специфических праймеров, в количестве, достаточным для его детекции. Детекция продуктов амплификации осуществляется с помощью электрофореза в агарозном геле (большинство отечественных тест-систем) либо путем гибридизации со специфическим к последовательности ампликона олигонуклеотидным зондом.

Отличительной особенностью ПЦР-диагностики является универсальность подхода для выявления различных инфекционных агентов. Так как объектом исследования служит молекула ДНК, обладающая сходными химическими свойствами у всех организмов, процедуры выявления вирусной, бактериальной, человеческой ДНК одинаковы, что позволяет проводить комплексное исследование биопробы методом ПЦР.

Наряду с культуральным методом и микроскопией, ПЦР является прямым методом выявления возбудителя, но при этом обладает существенно большей чувствительностью. Чувствительность ПЦР достигает единичных копий возбудителя в биопробе, что позволяет существенно повысить эффективность выявления инфекционных агентов непосредственно в клиническом образце, минуя стадию бактериологического посева. Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики представители микрофлоры с внутриклеточной или мембранной локализацией (Chlamydia trachomatis, представителей семейства Mycoplasma и др.), а также труднокультивируемых, некультивируемых и персистирующих форм микроорганизмов, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Применение метода ПЦР диагностики позволяет избежать сложностей идентификации микроорганизмов, имеющих малые физические размеры и разнообразные формы, так как снимаются ограничения на размер и формы возбудителя, накладываемые использованием световой микроскопии с окраской мазка по Грамму.

Например, особенностью протекания микоплазменных инфекций является стертый иммунный ответ организма хозяина и высокая антигенная изменчивость самого возбудителя, что делает неэффективным использование методов ИФА и выводит на первый план ПЦР-диагностику.

В урогинекологической практике наиболее рационально и экономически обоснованно использование метода ПЦР для выявления Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, представителей семейства Mycoplasma, Gardnerella vaginalis и вирусных инфекций (урогенитального герпеса и цитомегаловируса). В последнее время ПЦР активно используется для выявления представителей анаэробной флоры — Вacteroides spp, Mobiluncus curtissi, Fusobacterium nucleatum.

С появлением метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) другие методы выявления генома возбудителей инфекций отошли на второй план. Это связано, прежде всего, с чрезвычайно высокой чувствительностью метода, который позволяет обнаружить единичные копии вирусной ДНК в материалах от больных.

Наши услуги